流式细胞仪单细胞悬液样品的制备方法-中国仪器网 - 澳门永利网上娱乐
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流式细胞仪(Flow cytometer )是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

不同组织来源的实体组织和实体瘤样品,需要依照其不同的特点选择不一样的分散细胞的方法,这样才能使单细胞产量高,损失少。常用的的方法有以下几种,下面就让小编带你了解一下吧。

酶消化法

按照分散组织的种类来选择要用的酶。

胶原酶:降解几类分子类型的胶原。

弹性蛋白酶:消化糖蛋白、弹性蛋白的纤维。

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胰蛋白酶:水解酯键,肽键。

溶解酶:水解糖蛋白、肽的糖苷键。

1.在离心管内放入新鲜的组织,加入1到2毫升,恒温37度或者室温酶消化20到30分钟,每隔一段时间振荡或者吹打。

2.停止消化,将细胞悬液用300目尼龙网过滤,消除细胞团块,低速离心去除细胞碎片。

3.把制备好的单细胞悬液保存备用或者进行荧光标记。

要留意酶使用的消化时间,温度,ph值,浓度,酶活性。

机械法

利用物理方法给与组织一定的压力,让细胞从组织中分散开来,有研磨法、剪碎法、网搓法。

机械法容易造成细胞团块和碎片,在实际操作过程中,需要去除团块和碎片,机械法通常和其他方法配合使用。

化学处理法

原理:将组织细胞间起黏着作用的钙,镁离子分离出来。从而使得细胞分散开来。平常使用的试剂有EDTA、EGTA、TPB....

特点:如果使用化学法,那么细胞的存活率非常低。

机械法通常会使得细胞严重损失,只能获得较少的细胞,使用机械法必须要除去细胞碎片和团块防止影响流式细胞仪检测结果。

酶消化法和化学法虽然对组织的分散效果比较好,但会使得所检测的细胞减少。

所以需要依据实验目的选择适合的制备方法,以确保细胞呈单个分散状态,细胞碎片和团块量少。细胞的活性没有受到损伤,能够进行下一步的荧光染色。


2019-04-16 15:36:09 浏览次数:139次