流式细胞样品制备的注意事项-中国仪器网 - 澳门永利网上娱乐
为您推荐:
中国仪器网 中国仪器网 流式细胞仪 流式细胞样品制备的注意事项

网站地图

澳门永利网上娱乐

众所周知,流式细胞分选技术是利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度。下面就让小编带你简单了解一下流式样品制备中的注意事项。

一、荧光素和抗体的选择

1)荧光素的选择

如今,国内很多引进的流式细胞仪只装了一个激光光源,就是488nm光源,因此我们需要选择可以被488nm激光激发的荧光素。例如:

检测细胞DNA与RNA含量:PI、7-AAD。

检测细胞蛋白、抗体或者抗原:FITC、PE、Per-CP、PE-CY5、PerCP-CY5.5。

检测细胞膜电位:Rho-123。

检测Ca2+:Fluo-3.

08.jpg

2)抗体的选择

必须选择流式用单克隆抗体,这一类抗体在制备的过程中质控非常严格。

二、样品的准备

有三个评价样品制备优劣的指标:

1)细胞的密度,细胞的密度不能小于1*10的六次方/ml。

2)非特异荧光,不超过百分之一。

3)细胞的碎片或者聚集体,不能出现肉眼可见的团块。

流式样品制备过程中的常见问题和方法

问题:细胞密度低

原因:制备过程中细胞损失

方法:增加离心时间、吸弃上清。

问题:非特异荧光强

原因:抗体不纯,死亡细胞多

方法:选择高纯度的抗体,用同型对照抗体或双标记排除非特异荧光。

问题:碎片多

原因:细胞死亡,机械损伤

方法:在细胞生长状态良好时检测,防止反复吹打。

问题:细胞聚集

原因:消化不完全,酒精固定造成的细胞粘连

方法:彻底消化、在用酒精固定细胞时加入终浓度为百分之1.5-3的小牛血清。

问题:荧光弱

原因:灵敏度不够,抗体加入量不饱和,反应时间少

方法:改用生物素-亲和素,增加抗体的用量,延长反应的时间

问题:检测不出二倍体峰

原因:凋亡测试的方法不对

方法:改用原位末端标记或者PI与Annexin-V双标记法


2019-04-16 15:22:16 浏览次数:85次