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微流式细胞仪:以微毛细管技术为基础的新一代高性能流式细胞仪。自1998年微毛细管技术用于流式细胞检测的技术在美国获得专利以来,微流式技术以微样本量、微操作量、微学习量、微负担以及微体积,为肿瘤学、免疫学、慢性疾病研究以及新药研发和转化医学等领域提供检测方案。

应用

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哈佛永利娱乐网站医学院的Crawford博士提到:“微毛细管技术被引入流式细胞仪彻底改变了我们对实验动物模型建立的思路。以前,当我们需要临床前药物测试时,我们不得不在每一个时间点杀死一只小鼠以获得足够的全血样本量。而现在,每次实验只需要一滴血,因此就可以将同一只小鼠保留下来,检测不同时间点的变化。从而使我们获得了以前从来没有的生物学信息:即在同一只小鼠上监测疾病不同进程下的免疫功能变化。”

休斯顿永利娱乐网站运动医学教授McFarlin博士在研究性论文中提到:“目前为止,很少有研究者对同一只小鼠进行纵向的疾病进程跟踪研究,这是因为传统的流式细胞仪无法支持超微样本量的检测。微毛细管细胞分析仪使得利用单核细胞对慢性免疫疾病发展进行纵向跟踪的实验设计成为现实。”

以微毛细管为基础的微流式对上样样品量的需求降低至传统技术的十分之一。这也就为珍稀来源样本的研究、新药筛选、肿瘤研究、干细胞研究以及系统性疾病的研究提供了有力的检测工具,开创了实验动物模型检测的新思路。

微流式检测方案

以较为常见的T淋巴细胞亚群检测为例

T淋巴细胞亚群在许多临床疾病中可发生异常改变,特别是免疫功能受损的病人。测定T淋巴细胞亚群变化对了解疾病的发病机制、指导临床治疗、控制疾病的发生发展均有重要意义。根据不同的表面标志物可以对T细胞进行分群,其中CD3+/CD4+为辅助性T细胞,CD3+/CD8+为杀伤性T细胞。

使用流式细胞仪和荧光标记抗体,可以对人全血标本中T细胞CD3/CD4进行分群和绝对计数。

实验流程:

1. 静脉采血,肝素或EDTA抗凝;

2. 在试管中加入10ul CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PECY5 抗体;

3. 向试管内加入10ul抗凝全血(约1×10的5次方个细胞)混匀试剂和全血;

4. 室温(18-25℃)避光孵育20min;

5. 加入180ul 1X 红细胞裂解液;

6. 室温(18-25℃)避光孵育15min;

7. 使用微流式细胞分析仪获取结果


2019-04-16 15:05:28 浏览次数:48次